Pruebas microbiológicas

Prueba de producto no estéril

Las pruebas se apoyan en consonancia con los requisitos compéndiales armonizados para el examen microbiológico de productos no estériles y las pruebas de microorganismos especificados, normalmente mediante los métodos de filtración por membrana o recuento en placa. ALS realiza evaluaciones de idoneidad del método para los métodos de prueba seleccionados, lo que demuestra la recuperación de microorganismos en presencia del producto, antes de las pruebas rutinarias.

ALS maneja de forma rutinaria una amplia gama de matrices de muestras, incluidos antibióticos más agresivos, API, desinfectantes y formulaciones acuosas cargadas de conservantes, que pueden requerir neutralización para la eliminación de la actividad antimicrobiana paralela a la demostración científica de ausencia de toxicidad neutralizante. La idoneidad del método de recuento debe demostrarse en presencia del producto.

Todas las instalaciones de ALS se esfuerzan por lograr las mejores prácticas de la industria, incluidas las recomendaciones establecidas en el Capítulo USP <1117> entre otros. Aunque no es exhaustivo, los criterios de aceptación de Compendia para la calidad de la microbiología de las formas de administración no estériles se definen principalmente por la vía de administración respaldada por evaluaciones de impacto basadas en el riesgo, como se menciona en la USP <1111>. Debe determinarse la necesidad de controles adicionales de microorganismos objetables para cada producto. Se aplican criterios alternativos a los fármacos, los medicamentos a base de hierbas y los suplementos dietéticos, aunque, en cualquier caso, los requisitos típicos incluyen:

Pruebas de enumeración microbiana

• TAMC (recuento microbiano aeróbico total)
• TYMC (recuento total combinado de levaduras y mohos)

Microorganismos especificados

• Staphylococcus aureus
• Pseudomonas aeruginosa
• Escherichia coli
• Salmonella
• Candida albicans
• BTGN (bacterias gram negativas tolerantes a la bilis)
• Clostridia
• BCC (Burkholderia cepacia)

Aunque los compendios están armonizados para la mayoría de las formas de administración no estériles, las pruebas se realizan de acuerdo con:

• USP ⟨61⟩ Examen de microbiología de productos no estériles: Pruebas de enumeración microbiana
• USP ⟨62⟩ Examen de microbiología de productos no estériles: Pruebas para microorganismos especificados
• Ph. Método europeo 2.6.13 Examen de microbiología de productos no estériles
• Ph. Método europeo 2.6.12 Pruebas de enumeración microbiana

ALS puede incluir microorganismos adicionales especificados y objetables en los regímenes de análisis, como los aislados de la monitorización ambiental, donde persisten los riesgos conocidos.

Se pueden utilizar otros métodos de prueba, incluidos métodos de microbiología rápidos, para las pruebas de productos, pero requerirán validación para demostrar su idoneidad y equivalencia con los métodos compéndiales. Como proyectos técnicos, ALS puede apoyar el desarrollo y la validación de procedimientos alternativos.

Las determinaciones de la actividad del agua pueden ser compatibles según los métodos de USP <922> y Ph. Eur. 2.9.39.

Pruebas de eficacia de conservación

La AET (eficacia del conservante antimicrobiano), también conocida como PET (prueba de eficacia del conservante), cuestiona la eficacia del sistema conservante antimicrobiano en fármacos no estériles para prevenir el crecimiento de microorganismos que pueden introducirse en el producto durante la fabricación o su uso. 

Las pruebas de eficacia de los conservantes son necesarias para todas las formas acuosas tópicas y orales, que contienen conservantes, e inyecciones envasadas para múltiples dosis, concretamente cuando el entorno del producto (p. ej., pH, actividad del agua y técnica de conservación) puede ser propicio para la proliferación microbiana.

Las pruebas de idoneidad, según lo recomendado por los compendios, demuestran la validez del procedimiento seleccionado al demostrar experimentalmente la recuperación de microorganismos diana en presencia del producto. El procedimiento de preparación debe eliminar la actividad antimicrobiana residual del producto mediante dilución, filtración u otros desactivadores adecuados.

ALS cuenta con una amplia experiencia en la verificación de la idoneidad del método para una gama de formulaciones y sistemas de conservación y respalda las pruebas de eficacia de conservación mediante diversos enfoques, incluidos:

• USP <51> Pruebas de eficacia antimicrobiana
• Ph. Eur. 5.1.3 - Eficacia de la conservación antimicrobiana
• ISO 11930 – Evaluación de la protección antimicrobiana de un producto cosmético
• Métodos específicos del cliente y estudios personalizados

Prueba de producto estéril

La prueba de esterilidad y la de endotoxinas bacterianas se realizan de forma rutinaria, esta última en entornos asépticos estrictamente controlados, en aguas estériles, fármacos y productos sanitarios. 

Las pruebas de endotoxinas se ofrecen utilizando una serie de metodologías de compendios diferentes, como las prescritas por el Capítulo ⟨85⟩ de USP y la Ph. Eur. 2.6.14 (método europeo), que proporcionan opciones para las que una técnica aislada podría ser inadecuada. La presencia de endotoxinas en una sustancia o producto puede enmascararse o mejorarse por factores que interfieren con la reacción. Se realiza una prueba de idoneidad inicial, una prueba de factores interferentes, de forma rutinaria en tres lotes de productos o preparaciones antes de las pruebas rutinarias. ALS ofrece una posición de:

• Experiencia significativa en resolución de problemas y resolución de interferencias
• Manipulación rutinaria de matrices de muestras complejas, incluidos productos sanitarios complejos
• Comprensión profunda y adopción de los compendios y las directrices normativas
• Plazos de entrega rápidos y contingencia
• Inversión continua en nuevas tecnologías y equipos de pruebas
• Una red de apoyo global de microbiólogos experimentados

Las pruebas de endotoxinas se pueden realizar de acuerdo con diversos apéndices y estándares:

• USP Capítulo ⟨85⟩ Test de endotoxinas bacterianas. Actual.
• USP Capítulo ⟨161⟩ Productos sanitarios—Pruebas de endotoxinas bacterianas y pirógenos
• Farmacopea británica. (BP) Apéndice XIV C. Actual.
• Farmacopea Europea. (FE) 2.6.14. Actual.
• Farmacopea japonesa (JP) 4.01. Actual.
• ANSI/AAMI ST72:2011

Al igual que con la Endotoxina, la prueba de esterilidad viene respaldada por las metodologías de compendia Ph. Eur. (método europeo) 2.6.1, USP Capítulo ⟨71⟩ y pruebas de esterilidad, así como los requisitos ISO para productos sanitarios. La filtración por membrana se emplea comúnmente cuando los productos son filtrables mediante inoculación directa que admite productos no filtrables. Se realizan pruebas de idoneidad del método para todos los productos nuevos y siempre que las condiciones experimentales cambien o varíen. Para respaldar la fabricación aséptica, ALS también admite simulaciones de llenado de medios, así como monitorización medioambiental (véase a continuación).

Container Closure Integrity Testing

Container Closure Integrity Testing (CCIT) is an assay that evaluates the adequacy of container closure systems to maintain a sterile barrier against potential contaminants. Contaminants that could potentially cross a container closure barrier include microorganism, reactive gases, and other substances (USP <1207>). Container closure systems should maintain the sterility and product quality of sterile final pharmaceutical, biological, and vaccine products throughout their shelf-life (Ewan, S. et al., 2015).

Based on the drug formulation (e.g. liquid or lyophilized) and the type of the container (e.g. bottle, vial, ampule and syringe etc.) various methods can be employed to perform the container closure.

Non-destructive

• Electrical Conductivity and Capacitance Test (HVLD)
• Laser-based Gas Headspace Analysis

Destructive

• Blue Dye Ingres Leak Test
• Microbial Immersion Testing

Various CCIT techniques can be supported between ALS and our partners NUVISAN.

Particulate Testing

ALS can support particulate testing alongside microbiological testing of sterile drug products. Particulate contamination of injections and infusions consists of extraneous, mobile undissolved particles unintentionally present in the solutions. It is considered a critical risk with quality control testing commonplace throughout in-process controls and a mandatory testing requirement in release testing specifications. Particulate Contamination is predominately split into two forms: Visible and Sub-Visible. ALS commonly supports the following compendia in connection with the practical application of industry best practices:

• Ph. Eur. 2.9.20 Appendix XIII B. Particulate Contamination: Visible Particles / USP ⟨790⟩ Visible Particulates in Injections
• Ph. Eur. 2.9.19 Method I / USP General Chapter 788: Light Obscuration Particle Count Test
• Ph. Eur. 2.9.19 Method 2 / USP General Chapter 788: Microscopic Particle Count Test

Control medioambiental 

Los programas de monitorización de microbiología eficaces respaldan el control microbiológico general dentro de las instalaciones de fabricación. En el caso del procesamiento aséptico, la supervisión de salas limpias, sistemas de barrera de acceso restringido (RABS) y aisladores, se incluyen normalmente gases comprimidos, superficies, aire y cualquier otro material y equipo que pueda producir un riesgo de contaminación. Los requisitos obligatorios se establecen para el procesamiento aséptico según la USP ⟨1116⟩

Los programas de control y monitorización de la microbiología para la fabricación no estéril aún no están bien definidos por los compendios o directrices normativas. Al igual que en la aséptica, el alcance de la monitorización depende de la actividad de fabricación, aunque tiende a estar impulsado por evaluaciones de riesgos específicas de circunstancias con toma de muestras y pruebas proporcionales al riesgo de la cadena de suministro. Naturalmente se espera una justificación científica sólida y el análisis de tendencias de los datos generados ayuda a respaldar la comprensión y la eficacia.

ALS ofrece una gama completa de pruebas de apoyo para programas de monitorización medioambiental estériles y no estériles, incluidos:

Incubación, enumeración y notificación de:

• Tiras y placas de aire activas
• Gas comprimido afectado (cumple los requisitos de la norma ISO 8573)
• Placas de contacto
• Estampados de guantes (impresiones de dedos)
• Placas de sedimentación (supervisión pasiva del aire)

Inoculación de placas de control en blanco para promoción del crecimiento/pruebas de fertilidad.

Prueba de agua (calificación del rendimiento y supervisión rutinaria)

• Alimentación potable
• Agua purificada (a granel y en contenedores)
• Producto utilizado
• Agua utilizada en el proceso de lavado
• Vapor

Supervisión de superficies

• Hisopos
• Placas de contacto
• Drenajes

Además de las pruebas, ALS ofrece servicios de asesoría y es proactivo en su apoyo a:

• La educación en toda la empresa sobre los programas de monitorización medioambiental y su aplicación
• El diseño y la evaluación de los programas de monitorización de microbiología
• Las evaluaciones de riesgos
• La formación técnica y establecimiento (p. ej., selección de medios de cultivo, selección de condiciones de incubación y mejores prácticas de toma de muestras)
• Validación de técnicas de supervisión
• Cualificación y supervisión del rendimiento posterior
• Establecimiento de criterios de aceptación y establecimiento de límites (entornos no estériles)
• Investigaciones y análisis de causas