Testes microbiológicos

Teste do produto não estéril

Os testes são suportados de acordo com os requisitos de compêndio harmonizados para o Exame Microbiológico de Produtos Não Esterilizados e os Testes para Microrganismos Especificados, normalmente pelos métodos de Filtração por Membrana ou Contagem de Placas. A ALS avalia a adequação dos métodos de teste selecionados, demonstrando a recuperação de microrganismos na presença do produto, antes dos testes de rotina.

A ALS lida habitualmente com uma vasta gama de matrizes de amostras, incluindo antibióticos mais agressivos, API, desinfetantes e fórmulas aquosas carregadas de conservantes, que podem necessitar de neutralização para a remoção da atividade antimicrobiana paralelamente à demonstração científica da ausência de toxicidade do neutralizador. A adequação do método de contagem deve ser demonstrada na presença do produto.

Todas as instalações da ALS esforçam-se por alcançar as melhores práticas da indústria, incluindo as recomendações estabelecidas no Capítulo USP, <1117> entre outros. Embora não sejam exaustivos, os critérios de aceitação dos Compêndios usados para a qualidade microbiológica de formas de dosagem não estéreis são definidos, principalmente, pela via de administração apoiada por avaliações de impacto baseadas no risco, conforme referido na USP. <1111>A necessidade de controlos adicionais de microrganismos censuráveis deve ser determinada para cada produto. Os critérios alternativos são aplicáveis a API, medicamentos à base de plantas e suplementos dietéticos, embora, em qualquer caso, os requisitos típicos incluam:

Testes de enumeração microbiana

• Contagem microbiana aeróbica total (TAMC)
• Contagem total combinada de fungos e bolores (TYMC)

Microrganismos Especificados

• Staphylococcus aureus
• Pseudomonas aeruginosa
• Escherichia coli
• Salmonela
• Candida albicans
• Bactérias Gram-negativas tolerantes à bile (BTGN)
• Clostridia
• Burkholderia cepacia (BCC)

Embora os compêndios sejam harmonizados para a maioria das formas de dosagem não estéreis, os testes são realizados de acordo com:

• USP (61) Exame Microbiológico de Produtos Não Esterilizados: Testes de enumeração microbiana
• USP (62) Exame Microbiológico de Produtos Não Esterilizados: Testes para Microrganismos Especificados
• Ph. Método Eur. 2.6.13 Exame Microbiológico de Produtos Não Esterilizados
• Ph. Método Eur. 2.6.12 Testes de Enumeração Microbiana

A ALS pode incluir outros microrganismos especificados em regimes de teste, tais como isolados da monitorização ambiental, onde existam riscos conhecidos.

Outros métodos de teste, incluindo métodos microbiológicos rápidos, podem ser usados para teste do produto, embora necessitem de validação para demonstrar a sua adequação e equivalência aos métodos compendiais. Como Projetos Técnicos, a ALS pode apoiar o desenvolvimento e validação de procedimentos alternativos.

As determinações da atividade da água podem ser suportadas de acordo com métodos USP <922> e Ph. Eur. 2.9.39.

Testes de Eficácia de Conservantes

A Eficácia de Conservantes Antimicrobianos (AET em inglês), também conhecida como Teste de Eficácia de Conservantes (PET em inglês), desafia a eficácia do sistema de conservantes antimicrobianos em fármacos não estéreis na prevenção do crescimento de microrganismos que podem ser introduzidos no produto durante o fabrico ou utilização do produto. 

São necessários testes de eficácia de conservação para todas as formas tópicas e orais hidrossópicas, que contenham conservantes e injeções embaladas para doses múltiplas, nomeadamente onde o ambiente do produto (por exemplo, pH, atividade da água e técnica de preservação) possa ser propício à proliferação microbiana.

O teste de adequação, conforme recomendado pelos compêndios, demonstra a validade do procedimento selecionado, demonstrando, de forma experimental, o isolamento de microrganismos alvo na presença do produto. O procedimento de preparação deve remover a atividade antimicrobiana residual do produto por diluição, filtração ou outros inativadores adequados.

A ALS tem uma vasta experiência na verificação da adequação do método para uma gama de fórmulas e sistemas conservantes e apoia o Teste de Eficácia Conservante através de várias abordagens, incluindo:

• USP <51> Teste de Eficácia Antimicrobiana
• Ph. Eur. 5.1.3 – Eficácia da Preservação Antimicrobiana
• ISO 11930 – Avaliação da Proteção Antimicrobiana de um Produto Cosmético
• Métodos específicos do cliente e estudos personalizados

Teste do produto estéril

Os testes de endotoxinas bacterianas e os testes de esterilidade são suportados de forma rotineira, sendo que estes últimos em ambientes asséticos estritamente controlados, em águas estéreis, medicamentos e dispositivos médicos. 

Os testes de endotoxina são oferecidos utilizando várias metodologias de compêndios diferentes, tais como as prescritas pelo Capítulo USP (85) e Ph. Método Eur. 2.6.14, fornecendo opções nas situações onde uma técnica isolada pode não ser a mais adequada. A presença de endotoxinas numa substância ou produto pode ser mascarada ou promovida por fatores que interferem com a reação. Um teste de adequação inicial, um teste para fatores interferentes, é realizado de forma rotineira em três lotes de produto ou preparações antes do teste de rotina. A ALS oferece uma posição de:

• Experiência significativa com resolução de problemas e superação de interferências
• Manuseamento rotineiro de matrizes de amostras complexas, incluindo dispositivos médicos complexos
• Uma compreensão profunda e adoção de compêndios e diretrizes regulatórias
• Tempos de resposta rápidos e contingência
• Investimento contínuo em novas tecnologias e equipamentos de teste
• Uma rede de apoio global de microbiologistas experientes

O teste de endotoxinas pode ser realizado de acordo com vários padrões e compêndios:

• Capítulo USP (85) Teste de Endotoxinas Bacterianas. Atual.
• Capítulo USP (161) dispositivos médicos—Testes de pirogénio e endotoxina bacteriana
• Farmacopeia Britânica. (BP) Anexo XIV C. Atual.
• Farmacopeia Europeia. (EP) 2.6.14. Atual.
• Farmacopeia Japonesa (JP) 4.01. Atual.
• ANSI/AAMI ST72:2011

Juntamente com a análise de endotoxina, o teste de esterilidade é suportado por metodologias do compêndio Ph. Método da Eur. 2.6.1, Capítulo USP (71) Testes de Esterilidade, bem como requisitos ISO para dispositivos médicos. A filtração por membrana é normalmente utilizada quando os produtos são filtráveis com inoculação direta suportando produtos não filtráveis. Os ensaios de adequação do método analítico são realizados para todos os novos produtos e sempre que as condições experimentais mudam ou variam. Para apoiar a produção assética, a ALS também suporta simulações de preenchimento de meios, bem como Monitorização Ambiental (ver abaixo).

Container Closure Integrity Testing

Container Closure Integrity Testing (CCIT) is an assay that evaluates the adequacy of container closure systems to maintain a sterile barrier against potential contaminants. Contaminants that could potentially cross a container closure barrier include microorganism, reactive gases, and other substances (USP <1207>). Container closure systems should maintain the sterility and product quality of sterile final pharmaceutical, biological, and vaccine products throughout their shelf-life (Ewan, S. et al., 2015).

Based on the drug formulation (e.g. liquid or lyophilized) and the type of the container (e.g. bottle, vial, ampule and syringe etc.) various methods can be employed to perform the container closure.

Non-destructive

• Electrical Conductivity and Capacitance Test (HVLD)
• Laser-based Gas Headspace Analysis

Destructive

• Blue Dye Ingres Leak Test
• Microbial Immersion Testing

Various CCIT techniques can be supported between ALS and our partners NUVISAN.

Particulate Testing

ALS can support particulate testing alongside microbiological testing of sterile drug products. Particulate contamination of injections and infusions consists of extraneous, mobile undissolved particles unintentionally present in the solutions. It is considered a critical risk with quality control testing commonplace throughout in-process controls and a mandatory testing requirement in release testing specifications. Particulate Contamination is predominately split into two forms: Visible and Sub-Visible. ALS commonly supports the following compendia in connection with the practical application of industry best practices:

• Ph. Eur. 2.9.20 Appendix XIII B. Particulate Contamination: Visible Particles / USP ⟨790⟩ Visible Particulates in Injections
• Ph. Eur. 2.9.19 Method I / USP General Chapter 788: Light Obscuration Particle Count Test
• Ph. Eur. 2.9.19 Method 2 / USP General Chapter 788: Microscopic Particle Count Test

Monitorização ambiental 

Os programas eficazes de monitorização microbiológica apoiam o controlo microbiológico geral nas instalações de fabrico. No caso de processamento assético, a monitorização de salas limpas RABS (Sistemas de barreira de acesso restrito) e isoladores inclui normalmente gases comprimidos, superfícies, ar e quaisquer outros materiais e equipamentos que possam produzir um risco de contaminação. São definidos requisitos obrigatórios para o processamento assético de acordo com a USP (Farmacopeia dos Estados Unidos) (1116)

Os programas de monitorização e controlo microbiológicos para o fabrico não estéril ainda não estão bem definidos por compêndios ou diretrizes regulatórias. Numa veia semelhante à assética, a extensão da monitorização depende da atividade de fabrico, embora tenda a ser impulsionada por avaliações de risco específicas das circunstâncias com amostragem e testes proporcionais ao risco da cadeia de abastecimento. A fundamentação científica sólida é naturalmente esperada e a análise de tendências dos dados gerados ajuda a sustentar a compreensão e a eficácia.

A ALS oferece uma gama completa de testes de suporte para programas de monitorização ambiental estéreis e não estéreis, incluindo:

Incubação, enumeração e comunicação de:

• Placas de ar ativas e tiras
• Gás comprimido afetado (como suporte aos requisitos ISO 8573)
• Placas de contacto
• Impressões de luvas (Pontas dos dedos)
• Placas de assentamento (monitorização passiva do ar)

Inoculação de placas de controlo em branco para testes de Promoção de Crescimento/ Fertilidade.

Análise de água (qualificação de desempenho e monitorização de rotina)

• Alimentação Potável
• Águas purificadas (granel e em recipientes)
• Produto utilizado
• Água utilizada no processo de lavagem
• Vapor

Monitorização de superfície

• Zaragatoas
• Placas de contacto
• Drenos

Além dos testes, a ALS oferece serviços de consultoria e é proativa no apoio a:

• Formação nível da empresa sobre programas de Monitorização Ambiental e a sua aplicação
• O desenho e avaliação de programas de monitorização microbiológica
• Avaliações de risco
• Formação Técnica e Institucional (por exemplo, seleção de meios de cultura, seleção de condições de incubação e melhores práticas de amostragem)
• A validação das técnicas de monitorização
• Qualificação e monitorização do desempenho posterior
• Estabelecimento de Critérios de Aceitação e Definição de Limites (Ambientes Não Estéreis)
• Investigações e análise da causa raiz (RCA)